تهران، خ سهروردی شمالی، خ خرمشهر، خ شهید عربعلی، خ نسترن(15)، پلاک 4 طبقه اول (+98-21) 43 90 8000

همراهی مطمئن در زيست مولکولی

محصولات تشخیصی

خانه محصولات تشخیصی

آماده سازی نمونه

خشت اول گر نهد معمار کج، تا ثریا می رود دیوار کج!

اهمیت نمونه گیری و شرایط و استاندارهای اخذ، برچسب نمونه ها، شرایط نگهداری و حمل، عملیات اولیه و ... برکسی پوشیده نیست. نمونه ای از روش نامه مدون مرتبط با آزمون های مولکولی را هم می توانید اینجا ببینید.

امّا

آنچه اینجا مورد نظر ماست نگاه از منظری است که ممکن است کمتر بدان دقت کرده باشیم.

سؤال: چرا اکثریت قریب به اتفاق تولید کنندگان مطرح جهانی کیت استخراج DNA و یا RNA باصطلاح FDA-Approved یا با نشان  CE-IVD ندارند؟

پاسخ: زیرا معمولاٌ کیت های استخراج تنها به همراه کیت کاربری خاص متعاقب خود (مثلاٌ کیت کمی Real-Time PCR برای عنوانی خاص مثلاٌ HBV) قابلیت اعتبارسنجی (validation) و دریافت گواهینامه های مذکور را دارند. از همین منظر است که توصیه اکید ما، توجه به راهنمای کاربری کیت Real-Time PCR خود و استفاده از کیت/کیتهای معین شده توسط آنها است.

اهمیت قضیه در این است که اعتبار استفاده از روش های کمّی سازی مبتنی بر استفاده از استاندارد (absolute quantification) ، منوط به تیمار یکسان استانداردها و نمونه ها است. این مسأله از جند جهت قابل توجه است.:

الف) کارآیی (efficiency)فرایند استخراج: اگر روشی که شما برای استخراج دنا/رنای نمونه تان بکار می برید ، متفاوت از روشی باشد که برای استخراج دنا/رنای استانداردهای موجود در کیت به کار رفته است؛ حتی اگر روش/کیت شما بهتر هم باشد، به دلیل متفاوت بودن کارآیی (efficiency) فرایند استخراج، موجب ورود خطای سیستماتیک به محاسبات تان می شود.

ب)مقادیر مهارکننده ها(inhibitors):  در هر روند استخراجی، مقادیری از دیگر مواد ناخواسته نیز به همراه دنا/رنای مورد نظر استخراج می شوند که برخی از آنها می توانند موجب بازدارندگی (inhibition) واکنش PCR متعاقب و یا به تأخیر انداختن چرخه آستانه (Ct) گردند. اینجا نیز اهمیت تیمار یکسان استاندارها و نمونه ها برای دسترسی به مقادیر کمّی صحیح واضح است.

ج) شرایط بهینه استخراج کنترل داخلی ها: ممکن است برخی روش ها/ کیت های استخراج، بهترین شرایط را برای استخراج دنا/رنای اضافه شده به آزمون ها به عنوان کنترل داخلی را نداشته باشند. که منجر به عدم اعتبار نتیجه و الزام به تکرار آزمون و صرف هزینه کیت/لوازم مصرفی، نیروی انسانی و زمان گاه بسیار مهم خواهد شد.

پیشنهاد مشخص ما استفاده از کیت های استخراج تولیدی تکاپو زیست با نام تجاری  DynaBio است.

آزمون های تشخیصی Real-Time PCR

انتخاب کیت مناسب همیشه دغدغه ای جدی بوده است. در بازار امروزی ما نیز کیت های مختلفی حضور دارند، از کیتهای هندی، ترکیه ای و روسی گرفته تا کیتهای گران قیمت برند!

از دیدگاه ما جدول زیر که نتیجه چندین سال تجربه تخصصی ماست، راهنمای بسیار مناسبی برای انتخاب کیت است. امیدواریم شما هم آن را مفید بیابید.

تفسیر نتایج

آخرین و یکی از مهم ترین مراحل انجام یک آزمون تشخیصی، تفسیر نتایج و گزارش آن به پزشک معالج است.
در تفسیر یک آزمون تشخیصی کمی به روش Real-Time PCR در اولین قدم این موارد باید مورد توجه قرار گیرد:

 

میزان کارایی واکنش (efficiency) 

کارایی واکنش که از روی تفاوت مقادیر چرخه آستانه (Ct) بین استانداردها بدست آمده، باید بین ۹۰% تا ۱۰۵% باشد. هر چه این مقدار به ۱۰۰% نزدیک تر باشد، نشان دهنده تکرار پذیری بالاتر آزمون و طراحی صحیح آن است.

ضریب تعیین (R2)

R2 معیاری آماری است که نشانگر کیفیت برازش (Regression)  و به عبارت دقیقتر فاصله داده ها با مقادیر مدل انتخاب شده است. مقدار محاسبه شده برای R^2 نیز باید بیشتر از ۰٫۹۸ باشد.


در ادامه کار موارد زیر بررسی می شوند:

کنترل داخلی

سیگنال مربوط به کنترل داخلی برای نمونه ها و کنترل منفی استخراج شده باید در چرخه آستانه (Ct = ۳ ±۳۷) باشد.

پیام اصلی

سیگنال شناسایی کننده ویروس

کنترل منفی

عدم وجود سیگنال در کنترل منفی واکنش PCR

یک مثال عملی

به عنوان مثال در مورد کیت شناسایی و سنجش کمّی ویروس هپاتیت ب در پلاسما به روش Real-time PCR تولیدی شرکت تکاپوزیست که در آن سیگنال FAM مربوط به شناسایی ویروس و سیگنال JOE مربوط به کنترل داخلی میباشد موارد زیر به عنوان نتایج آزمون محتمل است :

  1. پیام (سیگنال) FAM در نمونه شناسایی ولی در کنترل های منفی شناسایی نمی شود. نتیجه آزمون مثبت است: نمونه حاوی دنای (DNA) ویروس هپاتیت ب است. در این حالت، ممکن است پیام JOE دیده نشود. زیرا غلظت های بالای دنایHBV می تواند منجر به کاهش یا حذف سیگنال کنترل داخلی گردد.
  2. پیام (سیگنال) FAM هم در نمونه و هم در کنترل های منفی شناسایی می شود. احتمال نتیجه مثبت کاذب وجود دارد: آزمون می بایست مجدداً تکرار شود.
  3. پیام (سیگنال) FAM در نمونه شناسایی نمی شود ولی پیام JOE (مربوط به کنترل داخلی) در نمونه شناسایی می شود (۳ ±۳۷ =Ct). در این حالت پیام کنترل داخلی احتمال وجود بازدارنده PCR را رد می کند و بنابراین: در نمونه، دنایHBV قابل شناسایی نیست و یا میزان آن پائین تر از حساسیت آزمون است. می توان با گزارش حساسیت آزمون به پزشک آن را منفی در نظر گرفت.
  4. هیچ سیگنالی در نمونه ها شناسایی نمی شود. در این حالت هیچ برداشت تشخیصی نمی توان داشت. اطلاعات مربوط به منشاء خطا و راه حل های آن را در بخش حل مشکل می توان یافت.

مطالب گفته شده در بالا به صورت روند نمای زیر تهیه شده و برای تفسیر نتایج تمامی کیتهای تشخیصی به روش Real-Time PCR تولیدی شرکت تکاپو زیست با نام تجاری DynaBio قابل استفاده است.

پشتیبانی

با توجه بومی بودن دانش فنی تولید کیت های تشخیصی، توان فنی تخصصی شرکت در پشتیبانی همه جانبه از مشتریان، از نکات قوت تکاپو زیست به شمار می رود. از سوی دیگر سیاست انتخابی شرکت، پشتیبانی مطلق از محصولات تولیدی و بخصوص کیت های Real-Time PCR  است.

پشتیبانی به هردو صورت حضوری و یا از راه دور (با استفاده از فناوری های ارتباطی) صورت می گیرد از جمله:

حضور کارشناسان شرکت در آزمایشگاه و راه اندازی آزمون ها

با وجود اینکه راهنمای کاربری کیت ها بصورت گام به گام و تفضیلی تنظیم شده است (برای مثال می توانید یکی را ببینید) و عملاٌ نیازی به راهنمایی بیشتر نیست؛ در اولین خرید کیت/ کیت ها و بنا به درخواست، کارشناسان شرکت آزمون/آزمون های مورد نظر را همراه با کارشناسان شما انجام داده و آن را روی دستگاه/ دستگاههای موجود در آزمایشگاه شما راه اندازی خواهند کرد.

 

مشاوره فنی برای تفسیر نتایج کلینیکی

اگر در تفسیر نتایجی که با کیت های DynaBio  بدست آمده است سوالی برایتان پیش آمد، باهم به بررسی آن خواهیم پرداخت...

 

پاسخ به سوالات فنی مربوط به کارکرد و اجزای کیت ها

اگر هنگام و یا پس از کار کردن با کیت های ما به سؤالی برخوردید حتما با ما تماس بگیرید. کارشناسان همیشه آماده پاسخگویی هستند.

 

حل مشکلات فنی احتمالی آزمایشگاه ها در کار با کیت های تولیدی به صورت حضوری

اگر در کار کردن با کیتهای DynaBio به مشکلی برخوردید ما را مطلع کنید. ما نهایت تلاش خود را برای حل مشکل خواهیم کرد و در صورت لزوم در آزمایشگاه شما خواهیم بود....

 

از جلفا تا چاه بهار!

ما خود را ملزم به رفع کامل هرگونه مشکل احتمالی می دانیم. پس اگر به هر علت، پس از تلاش برای رفع مشکل از طریق تلفن و با کاربری همزمان نرم افزار دستگاه شما، مشکل حل نشد، همکاران ما خود را موظف به حضور در آزمایشگاه شما و حل مسأله خواهند دانست و این تعهد فارغ از مکان آزمایشگاه شماست.